標(biāo)題：AF 546 ConA，Alexa Fluor 546標(biāo)記伴刀豆球蛋白A

【參數(shù)信息】

英文名稱：AF 546 ConA；Alexa Fluor 546 Concanavalin A

中文名稱：Alexa Fluor 546標(biāo)記伴刀豆球蛋白A；AF546-伴刀豆球蛋白A

激發(fā)波長(zhǎng)：556 nm

發(fā)射波長(zhǎng)：573 nm

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡(jiǎn)單概述】

AF 546 ConA（Alexa Fluor 546 Concanavalin A）是一種熒光標(biāo)記的凝集素復(fù)合物，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究中的細(xì)胞標(biāo)記和成像領(lǐng)域。

AF 546 ConA是由Concanavalin A蛋白與Alexa Fluor 546染料通過共價(jià)偶聯(lián)形成的復(fù)合物。其中：

ConA部分：是一種四聚體凝集素，分子量約104 kDa，特異性結(jié)合α-D-甘露糖（α-D-mannose）和α-D-葡萄糖（α-D-glucose）殘基，常見于細(xì)胞表面的糖蛋白和糖脂。

Alexa Fluor 546部分：是一種橙紅色熒光染料，激發(fā)波長(zhǎng)（Ex）為556 nm，發(fā)射波長(zhǎng)（Em）為573 nm，適用于TRITC濾光片系統(tǒng)，其量子產(chǎn)率高且光穩(wěn)定性優(yōu)異。

【使用方法】

（一）使用條件

儲(chǔ)存條件：

AF 546 ConA應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C、干燥、避光的環(huán)境中，避免反復(fù)凍融。建議將溶液分裝為單次使用的小份以保持穩(wěn)定性。

緩沖液要求：

ConA的結(jié)合活性依賴二價(jià)陽(yáng)離子，使用時(shí)需在緩沖液中添加1 mM CaCl2和1 mM MnCl2以維持其糖結(jié)合特異性。常用緩沖液為PBS（pH 7.4）或HEPES緩沖液（pH 7.5）。

工作濃度：

對(duì)于活細(xì)胞或固定細(xì)胞染色，推薦起始濃度為5–10 μg/mL，具體需根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)優(yōu)化。免疫組化應(yīng)用時(shí)濃度可能需調(diào)整至50–200 μg/mL。

光譜特性：

Alexa Fluor 546的激發(fā)/發(fā)射峰約為556/570 nm，適用于配備532 nm或561 nm激光器的熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀。需注意避免與其他熒光染料（如FITC/AF488）的光譜重疊。

（二）實(shí)驗(yàn)步驟（通用流程）

以下步驟基于熒光標(biāo)記ConA的典型細(xì)胞染色協(xié)議：

樣本準(zhǔn)備：

細(xì)胞固定：用3.7%甲醛或4%多聚甲醛室溫固定20分鐘，PBS沖洗2次。

透化處理（如需胞內(nèi)標(biāo)記）：使用0.1% Triton X-100處理5分鐘，PBS沖洗。

封閉：用4% BSA或血清封閉20–60分鐘，降低非特異性結(jié)合。

探針孵育：

將AF 546 ConA用含Ca2?/Mn2?的緩沖液稀釋至工作濃度（如5–10 μg/mL）。

滴加至樣本上，室溫或4°C避光孵育30分鐘至2小時(shí)（時(shí)間需優(yōu)化）。

清洗：

用PBS或HEPES緩沖液沖洗3次，每次5–10分鐘，去除未結(jié)合探針。

成像與分析：

使用TRITC/Cy3濾光片組觀察熒光信號(hào)。

可搭配核染色劑（如DAPI）進(jìn)行多色成像。

（三）注意事項(xiàng)

對(duì)照設(shè)置：建議設(shè)置未染色樣本及競(jìng)爭(zhēng)抑制對(duì)照（如添加α-甘露糖）以驗(yàn)證特異性。

光保護(hù)：操作全程需避光，防止熒光淬滅。

適用性：該探針主要用于標(biāo)記細(xì)胞表面α-甘露糖/葡萄糖結(jié)構(gòu)（如糖蛋白、糖萼），適用于真菌、哺乳動(dòng)物細(xì)胞的研究。

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本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn)，敬請(qǐng)知悉。