【參數(shù)信息】
英文名稱：Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit
中文名稱：螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒
CAS NO：61970-00-1
分子量：約61kDa
狀態(tài)：白色粉末
熱穩(wěn)定性：高溫下發(fā)光波長紅移，酶活性在常溫（20–25°C）穩(wěn)定
溶解性： 需用高鹽緩沖液（如1 M Tris，pH 7–8）復(fù)溶
純度：≥95%
儲存條件：-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技
【簡單概述】
螢火蟲螢光素酶普遍用作一種報(bào)告基因來研究基因調(diào)控和功能，以及用于藥物篩選。由于哺乳動物細(xì)胞或組織缺乏任何內(nèi)源性的熒光素酶活性和生物發(fā)光的天然屬性，螢火蟲熒光素酶是一種非常靈敏的遺傳報(bào)告子。
螢火蟲螢光素酶是一種分子量~61kD的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化螢光素（Luciferin）氧化成氧化熒光素，在此氧化過程中釋放出生物螢光。這一熒光可通過化學(xué)發(fā)光儀或液閃測定儀進(jìn)行測定。
Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit，正是利用螢光素為底物來檢測細(xì)胞內(nèi)螢火蟲螢光素酶活性的試劑盒，操作簡單、快速、靈敏且呈良好的線性關(guān)系。
優(yōu)勢
裂解能力強(qiáng)：能夠裂解絕大部分種類細(xì)胞。
信號更強(qiáng)：能夠精準(zhǔn)檢測弱啟動子的表達(dá)。
靈敏度更高：可檢測低至數(shù)百個(gè)細(xì)胞樣本。
線性范圍廣：線性檢測范圍超過酶濃度的8個(gè)數(shù)量級。
【作用機(jī)制：生物發(fā)光反應(yīng)與基因表達(dá)檢測】
熒光素酶催化的生化反應(yīng)是試劑盒的核心機(jī)制，分為以下兩步：
酶促發(fā)光反應(yīng)：
在 Mg2+、ATP、O2 存在下，熒光素酶（分子量61 kDa）催化底物 D-熒光素 氧化脫羧，生成 氧化熒光素，并釋放波長 560 nm 的黃綠色光。
基因表達(dá)關(guān)聯(lián)性：
將目標(biāo)基因的啟動子、增強(qiáng)子或 3'-UTR 等調(diào)控序列克隆至熒光素酶基因上游/下游，構(gòu)建報(bào)告基因質(zhì)粒。
轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄活性直接驅(qū)動熒光素酶表達(dá)，酶活性強(qiáng)度與基因表達(dá)水平正相關(guān)。
通過測量發(fā)光值，可量化藥物處理、信號通路激活等對基因轉(zhuǎn)錄的影響。
雙報(bào)告系統(tǒng)的協(xié)同作用：
為排除轉(zhuǎn)染效率差異的干擾，試劑盒常整合 海腎熒光素酶（Renilla luciferase） 作為內(nèi)參：
螢火蟲熒光素酶檢測目標(biāo)基因活性，海腎熒光素酶（底物為腔腸素）提供基線校正。
加入抑制劑淬滅螢火蟲信號后，再檢測海腎信號，確保結(jié)果準(zhǔn)確性。
【相關(guān)試劑】
DiOC18(3), 34215-57-1
CDCFDA,SE活細(xì)胞示蹤探針
Alexa Fluor 405-Streptavidin
Alexa Fluor 647-Streptavidin
Alexa Fluor 680-Streptavidin
2-NBDG葡萄糖攝取熒光探針
D-Luciferin,Sodium Salt
Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit
Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit
Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit
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本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn)，敬請知悉。
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