探針法獸類衣原體實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒的原理基于TaqMan探針技術(shù)，其核心機(jī)制是通過熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)實(shí)現(xiàn)病原體核酸的精準(zhǔn)定量。具體原理如下：
一、探針設(shè)計(jì)
1、雙標(biāo)記探針：特異性探針的5'端標(biāo)記報(bào)告熒光基團(tuán)(如FAM)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)(如TAMRA)。探針序列與衣原體目標(biāo)DNA區(qū)域互補(bǔ)結(jié)合。
2、能量抑制機(jī)制：完整探針時(shí)，熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收，無熒光釋放；當(dāng)探針與目標(biāo)DNA結(jié)合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性將探針切斷，報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，熒光信號(hào)被檢測(cè)。
二、定量過程
1、熒光累積與擴(kuò)增同步：每擴(kuò)增一個(gè)目標(biāo)DNA分子，即切斷一個(gè)探針并釋放一個(gè)熒光信號(hào)，熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物量成正比。
2、CT值分析：通過閾值循環(huán)數(shù)(Ct值)與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，計(jì)算初始模板濃度，實(shí)現(xiàn)絕對(duì)或相對(duì)定量。
三、技術(shù)優(yōu)勢(shì)
1、高特異性：探針僅與目標(biāo)序列結(jié)合，避免非特異性擴(kuò)增干擾。
2、高靈敏度：可檢測(cè)極低拷貝數(shù)的衣原體核酸(如幾個(gè)拷貝)。
3、閉管操作：全程無需開蓋，降低污染風(fēng)險(xiǎn)。
四、應(yīng)用場(chǎng)景
該技術(shù)廣泛應(yīng)用于獸類衣原體感染的早期診斷、疫情監(jiān)測(cè)及療效評(píng)估，其準(zhǔn)確率可達(dá)99%以上。
注：實(shí)驗(yàn)需配合優(yōu)化的引物設(shè)計(jì)、熱循環(huán)程序及數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)，確保檢測(cè)的重復(fù)性和可靠性。
