【參數(shù)信息】

英文名稱：Cy5.5 ConA；Concanavalin A-Cyanine5.5 ；Cyanine5.5-Concanavalin A

中文名稱：花菁染料CY5.5標(biāo)記刀豆球蛋白A；菁染料Cy5.5-伴刀豆球蛋白A ；Cy5.5-刀豆凝集素A

吸收波長(zhǎng)：650 nm

發(fā)射波長(zhǎng)：670 nm

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡(jiǎn)單概述】（花菁染料CY5.5標(biāo)記刀豆球蛋白A）

CY5-ConA是由CY5染料標(biāo)記的刀豆球蛋白A（Concanavalin A, ConA）。ConA是一種植物源凝集素，特異性結(jié)合糖蛋白和多糖的葡萄糖或甘露糖殘基。

CY5標(biāo)記后，可用于研究糖類代謝、細(xì)胞表面糖鏈分布及糖蛋白定位。

結(jié)構(gòu)說(shuō)明:

CY5染料由共軛的花菁鏈組成，發(fā)射近紅外熒光（吸收波長(zhǎng)650 nm，發(fā)射波長(zhǎng)670 nm）。

ConA分子通過(guò)其可反應(yīng)的氨基與CY5染料偶聯(lián)形成共價(jià)鍵。

標(biāo)記后的ConA保留了糖結(jié)合特性和CY5的熒光性能，可用于熒光顯微成像或流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。

其作用機(jī)制基于以下關(guān)鍵步驟：

特異性糖結(jié)合：ConA部分通過(guò)其四個(gè)亞基上的結(jié)合位點(diǎn)，特異性識(shí)別并結(jié)合細(xì)胞表面或溶液中的α-D-甘露糖吡喃糖和α-D-葡萄糖吡喃糖殘基。該結(jié)合需依賴二價(jià)金屬離子（如Ca2?和Mn2?）維持構(gòu)象活性。

熒光標(biāo)記與成像：CY5.5部分在近紅外光激發(fā)下發(fā)射強(qiáng)熒光信號(hào)（~710 nm），其長(zhǎng)波長(zhǎng)特性可有效穿透生物組織，減少自發(fā)熒光干擾，從而實(shí)現(xiàn)高對(duì)比度的成像。結(jié)合后，復(fù)合物可標(biāo)記目標(biāo)糖基化分子，用于動(dòng)態(tài)觀察糖蛋白分布、細(xì)胞膜相互作用或藥物遞送過(guò)程。

應(yīng)用延伸：在藥物研究中，Cy5.5 ConA可通過(guò)糖結(jié)合介導(dǎo)載體與細(xì)胞膜的相互作用，影響藥物釋放動(dòng)力學(xué)或靶向遞送效率。此外，其高靈敏度和生物相容性使其適用于腫瘤成像、免疫調(diào)節(jié)研究等場(chǎng)景。

【關(guān)于Cy5.5 ConA的細(xì)胞與組織糖基化成像有什么原理和步驟？】

（一）成像原理

特異性結(jié)合：ConA是一種凝集素，能特異性識(shí)別并結(jié)合細(xì)胞表面或組織中的糖蛋白和糖脂上的甘露糖/葡萄糖殘基。

熒光信號(hào)生成：Cy5.5染料通過(guò)共價(jià)鍵（如NHS酯-胺反應(yīng)）標(biāo)記在ConA上，形成Cy5.5-ConA復(fù)合物。Cy5.5在近紅外區(qū)域發(fā)射熒光，具有組織穿透性強(qiáng)、自發(fā)熒光干擾少、信噪比高的優(yōu)點(diǎn)。

應(yīng)用優(yōu)勢(shì)：適用于活細(xì)胞、固定細(xì)胞及組織切片的糖基化分布研究，尤其在腫瘤糖基化異常、免疫應(yīng)答等生物過(guò)程中有重要應(yīng)用。

（二）成像步驟（以細(xì)胞成像為例）

樣品準(zhǔn)備：

將細(xì)胞培養(yǎng)于蓋玻片或培養(yǎng)皿中，融合度達(dá)70–80%。

用PBS（pH 7.4）輕柔洗滌細(xì)胞，去除培養(yǎng)基殘留。

探針處理：

將Cy5.5-ConA探針用緩沖液（如PBS或培養(yǎng)基）稀釋至工作濃度（通常為1–10 μg/mL）。

將探針溶液加入細(xì)胞樣品中，在37°C下孵育15–30分鐘，避免光照。

洗滌與固定：

用PBS洗滌細(xì)胞3次，去除未結(jié)合的探針。

如需固定，可用4%多聚甲醛處理10分鐘，后再用PBS洗滌。

成像與觀察：

使用熒光顯微鏡（如共聚焦顯微鏡）觀察，激發(fā)波長(zhǎng)約675 nm，發(fā)射波長(zhǎng)約695 nm。

分析熒光信號(hào)分布，評(píng)估糖基化水平及定位。

（三）組織成像注意事項(xiàng)

組織切片需進(jìn)行脫蠟、水化及抗原修復(fù)處理。

后續(xù)步驟與細(xì)胞成像類似，但孵育時(shí)間可能延長(zhǎng)至30–60分鐘以確保探針滲透。

【相關(guān)試劑】

Annexin V-iFluor 488標(biāo)記

XFD514 tyramide AF514 酪胺

Amplite 熒光法丙二醇（MDA）定量試劑盒

6-ROX甘an酸 25 uM熒光法PCR檢測(cè)參照液

Cy5.5NS succinimidyl ester Cy5.5NS NHS酯

Cyanine 5 bissuccinimidyl ester, potassium salt

Cyanine 7 bissuccinimidyl ester, potassium salt

Cyanine 7 monosuccinimidyl ester, potassium salt

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本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn)，敬請(qǐng)知悉。